Glutathione Agarose 4FF
货号：KTSM302
规格：{{info.Specification}} ({{info.Specifications}})
储存条件：4~8 ℃（避免冻存）
保质期：12个月
运输：冰袋运输
Glutathion Agarose 4FF说明书.pdf
联系电话
4009963188
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产品说明
Glutathione Agarose 4FF适用于分离纯化GST标签蛋白、谷胱甘肽S-转移酶或谷胱甘肽依赖性蛋白，以4%琼脂糖凝胶为基质，用化学方法共价结合了还原型谷胱甘肽制作而成。
特点：
1. 快速、简单（一步纯化）
2. 载量高、流速快、易于放大
3. 温和的洗脱条件可以完整的保留蛋白的生物学活性
产品属性
项目 | 参数 |
基质 | 高度交联4%的琼脂糖 |
粒径范围 | 45-165 µm |
结合载量 | >20 mg (GST标签蛋白-40kDa)/ml(介质) |
pH稳定性 | 3-12 |
化学稳定性 | 所有常用水溶液，如：1M醋酸盐，pH 4.0、0.1M NaOH、70% 乙醇、8M尿素、6M 盐酸胍。 |
流速 | ≧250cm/h |
操作压力 | 0.1MPa |
贮存溶液 | 含20%乙醇的PBS |
贮存温度 | 2-8℃ |
常见问题及解决方案
问题 | 可能原因 | 解决方法 |
GST 融合蛋白的产量很低或无法检测到 | GST标签蛋白变性了 | 使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准 |
过度的裂解使目的蛋白变性 | ||
目的蛋白聚集产生了沉淀 | 在细胞裂解前溶液中加入DTT，终浓度为1-20 mM | |
融合蛋白改变了GST构象，影响了目的蛋白结合能力 | 测定pGEX中GST的结合力，对载体进行超声处理，检测其结合力，如果载体中GST有很高的亲和力，有可能融合蛋白改变GST的构象从而降低了GST标签蛋白的亲和力，可尝试增加linker长度 | |
降低结合温度至4℃，充分地清洗 | ||
融合蛋白形成包涵体 | 采用较低的温度(20-30℃)培养细胞,或者诱导过程中降低诱导剂的终浓度至<0.1 mM，或者缩短诱导时间 | |
复性后纯化 | ||
融合蛋白不能有效结合高亲和力 GST 纯化介质 | 增加填料与蛋白结合时间 | |
融合蛋白并不包含有活性的GST | 采用温和的超声破碎条件或者其他的裂解条件,比如采用溶菌酶 | |
融合蛋白被蛋白酶降解 | 在裂解步骤或洗涤步骤加入适量的蛋白酶抑制剂，如PMSF | |
融合蛋白不能有效地从树脂上洗脱下来 | 延长洗脱时间，或者增加洗脱液中还原性谷胱甘的浓度至15 mM或者更高 | |
调节节洗脱液的 pH 值至 8.0~9.0 | ||
在洗脱液中加入 Triton X-100(终浓度0.1%)、辛基-葡萄糖(终浓度 2%)或者 NacI(终浓度 0.1-1 M) | ||
一些宿主蛋白，比如伴侣蛋白，可能会和融合蛋白互相作用 | 在洗涤液中加入DTT(终浓度5 mM)。在纯化前将重组蛋白溶液和伴侣蛋白溶液(2 mM ATP 10mM MgSO4, 50 mM Tris-HC)37℃振荡 10 min | |
过度的超声处理会导致一些蛋白与融合蛋白相结合 | 采用温和的超声破碎条件或者其他的裂解条件 | |
有些白会与融合蛋白或树脂发生非特异性结合 | 优化洗涤条件：加入一些洗涤剂如 1% Triton X-100、 1%Tween-20、0.03% SDS 或者0.1% NP-40 可以降低非特异性吸附。优化洗涤液中的盐浓度也可以降低非特异性吸附 |
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